病原体鉴定与免疫细胞分析技术教学大纲
课程名称：病原体鉴定与免疫细胞分析技术
英文名：Pathogen Identification and Immune Cell Analysis Technique
课程编号：
实验总学时： 64
实验周学时：4
开设实验项目数：27
实验课学分： 3
面对其他院系：
本大纲主撰人：侯亚义 张伟云 沈苏南
一、 实验教学目标与基本要求：
微生物能诱发许多疾病的发生，疾病发生时机体内的免疫器官、细胞及分子等都可发生变化，这些改变与疾病关系的分析需要涉及细胞学、免疫学等方面的技术。为了培养员工良好的科学文化素质、创新精神与创新能力，使员工掌握现代医学技术和适应现代医学发展趋势，本实验课程将从病原体的检测和分析出发，以其诱导的疾病为基础，进而进行细胞与分子免疫学功能分析。在整个实验过程中，教师提出总体的实验思路，主要发挥引导、具体实验技能培训以及开发员工独立自主思考问题和解决问题能力的作用，具体的步骤由员工自己查阅资料进行详细设计。实验设计力求具有研究性、综合性、应用性及创新性。为达到这一目标，本实验教材仅提供相关的实验方法。
本实验课程的主要内容为：
1、微生物的实验技能培养。对微生物进行形态观察、分子生物学鉴定以及不同微生物培养技能的训练。筛选代表性的微生物。
2、疾病模型的建立。我们将选代表性的微生物感染动物，建立疾病动物模型。培养员工饲养动物、免疫动物、解剖动物、采血等方法。
3、模型动物的体液免疫的功能变化的分析。掌握酶联免疫检测技术以评价抗体的滴度、免疫电泳技术观察抗原抗体反应，学习抗体纯化和分离等技术。
4、模型动物的细胞免疫的功能变化的分析。学习细胞计数、形态观察、细胞分离和细胞培养的方法。了解流式细胞术，学习检测细胞DNA含量变化和细胞凋亡、细胞之间相互作用的方法。认识分子生物学技术在微生物学、细胞学和免疫学中的应用。
5、综合评价微生物诱导的疾病模型动物的免疫细胞、免疫因子和功能与疾病之间的关系。掌握实验结果总结和分析以及实验报告书写的技能。
二、实验课程内容与学时分配：
序号 | 实验项目名称 | 内 容 提 要 | 学 时 | |
本专业 | 非本 专业 | |||
1 | 油镜的使用及细菌形态观察 | 了解普通光学显微镜的构造与工作原理 掌握油镜的使用方法 初步了解各种细菌的基本形态特征 | 2 | |
2 | 细菌的染色法与形态学检查 | 了解不染色标本的检查法，掌握细菌涂片的制作、以及常见的各种细菌染色法， 观察细菌的形态和特殊结构。 | 2 | |
3 | 培养基的制备 | 了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一般方法和步骤。 | 2 | |
4 | 细菌的培养方法 | 掌握常用的细菌接种方法 熟悉细菌培养物性状的观察 | 2 | |
5 | 细菌的分布和消毒灭菌 | 了解和证实细菌在自然界及人体的分布，树立消毒与无菌观念。认识几种常用化学药品对细菌的作用，了解细菌受生物因素的影响及其实际意义。 | 2 | |
6 | 药物敏感试验 | 熟悉体外抗菌试验操作技术，掌握药物抗菌能力体外测定的常用方法及其用途 | 2 | |
7 | 细菌的变异性 | 了解L型细菌的常用诱导方法和L型菌落及形态染色特点，.通过本实验的比较观察，了解细菌鞭毛变异的表现以及S型和R型 变异株在固体培养基上生长的情况 通过对药物敏感株和耐药株在药物培养基上的生长情况的观察，认识自然界耐药菌株产生的过程 | 2 | |
8 | 细菌代谢产物的检测 | 了解细菌代谢的检查方法、原理以及在鉴定细菌上的意义 | 2 | |
9 | 病原性球菌的检查 | 熟悉病原性球菌的形态和培养特性，了解其一些特殊生化反应特点 | 2 | |
10 | 肠道杆菌 | 熟悉肠道杆菌的形态和培养特性，了解肥达氏反应的原理、方法和结果判定 | 2 | |
11 | 细菌质粒DNA的提取与检测（碱裂解法） | 了解细菌质粒提取的常用方法以及琼脂糖电泳检测的方法 | 2 | |
12 | 噬菌体 | 了解从污水中分离纯化大肠杆菌噬菌体的一般原理和方法，掌握双层琼脂平板法测定噬菌体效价的方法 | 2 | |
13 | 支原体、衣原体、立克次体和螺旋体检查 | 熟悉支原体、衣原体及立克次体的培养方法，了解支原体典型菌落及衣原体、立克次体、螺旋体的形态特征 | 2 | |
14 | 真菌 | 认识真菌的基本形态及菌落特点 | 2 | |
15 | 病毒的培养 | 熟悉实验室常用的几种病毒培养方法 | 2 | |
16 | 聚合酶链反应在检测微生物中的应用 | 了解聚合酶链反应的基本原理及在微生物检测中的应用。 | 4 | |
17 | 免疫血清的制备 | 掌握免疫血清的制备方法 | 2 | |
18 | 火箭免疫电泳 | 掌握免疫电泳的原理及方法 | 3 | |
19 | 补体的溶血实验 | 掌握补体的溶血实验的原理及方法 | 3 | |
20 | 半数溶血值(HC50)的测定 | 掌握半数溶血值(HC50)的测定的原理方法及应用 | 2 | |
21 | IgG的分离和纯化 | 掌握盐析法分离IgG的技术 | 3 | |
22 | 酶联免疫吸附实验（ELISA）测定单克隆抗体的效价 | 掌握酶联免疫吸附实验（ELISA）的原理方法及类型 | 3 | |
23 | 外周血单个核细胞分离及细胞计数和活力检测 | 掌握外周血单个核细胞分离及细胞计数和活力检测的原理方法及应用 | 3 | |
24 | T淋巴细胞的分离 | 了解T淋巴细胞的分离的技术 | 2 | |
25 | 免疫特异性玫瑰花环试验 | 掌握玫瑰花环试验的原理及方法 | 2 | |
26 | 流式细胞仪检测细胞凋亡——PI单染色法 | 了解流式细胞仪检测细胞凋亡的技术，掌握PI单染色法 | 3 | |
27 | 免疫PCR技术 | 掌握免疫PCR技术的原理及方法 | 4 | |
三、教学方式与考核要求：
教师讲解、示教，员工动手操作，教学相长。所采用的先进实验教学手段包括电教等多媒体教学，根据员工实验操作及实验报告进行考核。
四、实验教材、参考书：
（一）实验教材：
《病原体鉴定与免疫细胞分析技术》韦德1946体育官方入口编。
（二）参考书：
1.《临床微生物学》张颖悟等编，大连出版社，1990。
2.《基因诊断技术—非放射性操作手册》王申五主编，北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1992。
3.《免疫学和免疫学检验》陶义训编，人民卫生出版社，1997年
4.《免疫球蛋白异常的基础与临床》孔宪涛编，上海科学技术文献出版社，1997